紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的實(shí)驗(yàn)原理

由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm波長(zhǎng)處。在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值（OD₂₈₀）與其含量呈正比關(guān)系，可用作定量測(cè)定。

利用紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是民迅速、簡(jiǎn)便、不消耗樣品，低濃度鹽類(lèi)不干擾測(cè)定。因此，在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中（特別是在柱層析分離中）得到廣泛應(yīng)用。

此法的缺點(diǎn)是：（1）對(duì)于測(cè)定那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差；（2）若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質(zhì)，會(huì)出現(xiàn)較大的干擾。根據(jù)蛋白質(zhì)和核酸的吸收高峰不同，并利用這一性質(zhì)，通過(guò)計(jì)算可以適當(dāng)校正核酸的干擾作用。