測定膳食纖維的標準方法

一、實驗原理

膳食纖維又稱為植物細胞壁，它包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、果膠、角質(zhì)和二氧化硅等。本實驗用中性洗滌纖維測定法測定，該法所測的膳食纖維為不被人消化系統(tǒng)中的酶所消化，也不被中性洗滌劑溶解的組分。其原理是樣品經(jīng)熱的中性洗滌劑浸煮后，殘渣用熱的蒸餾水充分洗滌，除去樣品中游離淀粉、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)，然后加入α淀粉酶溶液以水解結(jié)合態(tài)的淀粉，再用蒸餾水，丙酮依次洗滌，以除去殘存的脂肪、色素等，殘渣經(jīng)烘干，即為不溶性膳食纖維。

二、實驗用品

（一）器材

（1）電熱恒溫干燥箱。

（2）恒溫箱。

（3）可調(diào)溫的電爐或可控溫的電熱板。

（4）抽濾裝置（包括抽濾瓶及水泵或真空泵）。

（5）干燥器（用無水氯化鈣或變色硅膠為干燥劑）。

（6）高型燒杯（容量600ml）。

（7）坩堝式耐熱玻璃濾器（容量為60ml，孔徑40~60µm；相當于250目~400目）。

（8）耐熱玻璃棉。

（二）試劑

（1）石油醚（沸點范圍35~60℃）。

（2）中性洗滌劑溶液

18.61g乙二胺四乙酸二鈉和6.81g四硼酸鈉（Na2B4O7.10H2O）用250ml蒸餾水加熱溶解；

?30g十二烷基硫酸鈉和10ml乙二醇獨Diethyl Ether（2-ethoxy-ethanol）溶于200ml熱蒸餾水中；

?4.56g Na2HPO4溶于150ml蒸餾水，將??和?3種溶液合并。然后用磷酸調(diào)節(jié)混合液pH至 6.9~7.1，zui后加蒸餾水至1000ml，即為中性洗滌溶液。此溶液使用期間如有沉淀生成，需在使用前加熱到60℃，使沉淀溶解。

（3）十氫萘。

（4）α淀粉酶溶液：取0.1mol/LNa2HPO4溶液610ml和0.1mol/L Na2HPO4溶液390ml混勻，配成pH7.0的磷酸鹽緩沖液。用此緩沖溶液配2.5%酶溶液，離心或過濾，取清液備用。

（5）丙酮。

（6）無水亞硫酸鈉。

（三）材料

小麥麩皮。

三、實驗程序

 1、樣品處理

    將烘干樣品磨細過20~30篩。準確稱取0.500~1.000g置于高型燒杯中。

 2. 加試劑

   依次加入以下試劑于高型燒杯中：

n中性洗滌劑溶液100ml（室溫）

n十氫萘2ml(樣品煮沸時如產(chǎn)生的泡沫不多，則可不加此試劑)。

n無水亞硫酸鈉0.5g。

3.熱處理

將上述燒杯置于電爐上加熱，使杯內(nèi)溶液在5~10min內(nèi)煮沸，自沸騰計時，維持微沸60min。

4.洗滌

    將燒杯內(nèi)的內(nèi)容物移入已稱重之耐熱玻璃濾器（內(nèi)鋪有耐熱玻璃棉，并已于110℃烤箱烘至恒重）內(nèi)，抽濾至干，再加入熱蒸餾水（100℃）約100ml洗殘渣，重復洗3次（用熱蒸餾水量約為 300~500ml）。

5. 酶處理

     加酶溶液約50ml于濾器中（濾器底部須加塞子，使之不漏溶液），使酶液浸沒殘渣，并加數(shù)滴甲苯以防腐，然后于恒溫箱37℃放置18h或過一整夜。

6.洗滌

    取出濾器，除去底部的塞子，抽濾，并用熱水約500ml分次洗去酶液。用碘液檢查是否有淀粉殘留，如淀粉已除盡，則可抽干濾液，然后加丙酮洗殘渣，抽干，再以丙酮洗一次。若有淀粉殘留，需重復“酶處理"步驟。

7. 將殘渣及濾器于烘箱中110℃烘至恒重，每次稱重時應先移入干燥器中，冷至室溫后稱量。

8.結(jié)果處理

    按下式計算樣品中膳食纖維含量：