飼用酵母菌的分離、鑒定、干燥方法

一、實(shí)驗(yàn)材料

豬場(chǎng)肥豬新鮮豬糞及釀酒糟

二、主要設(shè)備及儀器

PCR擴(kuò)增儀美國(guó)、高速低溫離心機(jī)、濃度測(cè)定儀、超純水系統(tǒng)、超凈工作臺(tái)；

恒溫?fù)u床、恒溫振蕩器、臺(tái)式離心機(jī)、電熱恒溫水浴鍋、恒溫烘箱、恒溫培養(yǎng)箱；

恒溫磁力攪拌器、電子天平、計(jì)算機(jī)成像系統(tǒng)、醫(yī)用高壓滅菌鍋、格蘭仕微波爐；

穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、超低溫冰箱、PH計(jì)。

三、緩沖液和常用試劑的配置

 1裂解液

 2醋酸鉀

 3醋酸鈉

 4TE緩沖液

 5TAE儲(chǔ)備液

 6瓊脂糖凝膠電泳上樣緩沖液

 7EB貯存液

四、培養(yǎng)基

1LB培養(yǎng)基:胰蛋白胨

2牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏

3馬丁氏培養(yǎng)基：葡萄糖

4馬鈴薯培養(yǎng)基：馬鈴薯

5麥芽汁培養(yǎng)基葡萄糖

6WL營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基

五、酵母菌的分離與純化

A分離：采用稀釋平板分離法,稱取待測(cè)樣品10g左右,放入裝有無(wú)菌水90ml并加入玻璃珠的離心管中,置于搖床震蕩20min,使微生物細(xì)胞分散,靜置。即成10-1稀釋液;再用1支無(wú)菌吸管吸取10-1稀釋液1ml移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中,吹吸3次,讓稀釋液充分混合,即成10-2稀釋液;再換1支無(wú)菌吸管吸取10-2稀釋液1ml移入裝有9ml無(wú)菌水的試管中,即成10-3稀釋液。同理,制成10-4、10-5、10-6稀釋液。取合適倍數(shù)的稀釋液1ml加入到孟加拉紅培養(yǎng)基中,靜置30分鐘后倒置放于28℃恒溫培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)三天。

B純化培養(yǎng):劃線純化法。滅菌PDA培養(yǎng)基,倒平板,挑取單菌落劃線,28℃倒置培養(yǎng)三天,如此工作重復(fù)三次,以得到純菌體。

六、酵母菌的鑒定

從豬糞和酒糟中共分離八株酵母菌,經(jīng)鑒定共有種酵母菌,它們分別是皺褶假絲酵母、釀酒酵母、一東方伊薩酵母、團(tuán)假絲酵母、熱帶假絲酵母、毛抱子菌屬。從豬糞中分離兩株酵母,分別是熱帶假絲酵母菌和毛抱子菌。這些分離出的酵母菌,除毛抱子菌外,其他都可以作為飼料酵母使用。

七、酵母菌發(fā)酵液的噴霧干燥。